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RESUMOBARBOSA, J. F. Inoculação e detecção de Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum em sementes de algodão (Gossypium hirsutum L.). 2007. 135 p. Tese (Doutorado em Agronomia, Área de Concentração Fitopatologia) Universidade Federal de Lavras, Minas Gerais, Brasil. No presente trabalho objetivou-se desenvolver uma técnica de inoculação artificial de sementes de algodão com Xanthomonas axonopodis pv. malvacearum (Xam), por meio do condicionamento osmótico do meio, visando a obtenção de sementes uniformemente contaminadas, sem alterar o poder germinativo das mesmas, bem como estabelecer metodologia segura, eficiente e rápida de detecção da bactéria em sementes de algodão. Avaliou-se a variabilidade entre isolados de Xam por meio da inoculação artificial em plantas de algodão, hipersensibilidade em plantas de fumo, tomate e pimentão, amplificação do DNA utilizando-se os primers 16S e 23S, ERIC e REP; desenvolveu-se um meio de cultura semi-seletivo para a detecção de Xam em sementes de algodão e testou-se a eficiência da técnica de imunofluorescência indireta na detecção da bactéria, utilizando-se três tipos de extrato de sementes: bruto, centrifugado e filtrado em membrana de Millipore®. Por meio do condiconamento osmótico, verificou-se que não houve diferença estatística entre os solutos manitol e sacarose quanto à porcentagem de germinação de sementes e crescimento bacteriano, e que nos potenciais osmóticos de -0,85 e -1,0 MPa a inibição de germinação das sementes sobre o meio 523 foi mais eficiente. A inoculação por condicionamento osmótico foi eficiente e o tempo de 24 horas de exposição à bactéria permitiu obter sementes com 84,5% de incidência de Xam. Eletromicrografias, realizadas por microscopia de varredura, revelaram a presença de Xam associada à tegumento das sementes em todos os tempos de inoculação. A incidência da bactéria nas sementes, detectada pelo plaqueamento direto em meio semi-seletivo, foi maior no método de inoculação por condicionamento osmótico com 88% de sementes infectadas, não havendo diferença significativa entre os métodos de inoculação utilizados para a porcentagem de cotilédones com sintomas da mancha angular. Diferenças quanto a virulência dos isolados em algodão foram observadas, sendo constatados quatro grupos distintos entre si. Para a reação de hipersensibilidade, plantas de tomateiro foram as mais indicadas na identificação de isolados patogênicos de Xam. Os primers 16S e 23S permitiram obter fragmentos de aproximadamente 680 pb. A amplificação via PCR utilizando a unidade repetitiva REP, foi efetiva para todos os isolados de Xam. No entanto, o número de padrões de bandas em cada isolado foi significativamente menor quando comparado aos primers ERIC. Utilizando-se o meio 523 de Kado amp; Heskett (1970) como base, desenvolveu-se o seguinte meio seletivo: 30 g manitol, 4 g de extrato de levedura, 8 g de caseína hidrolizada, 2 g de K2HPO4, 0,3 g MgSO4.7H2O, 15 g agar, 1000 mL água destilada, após autoclavagem adicionar, 50 mg de cefalexina, 50 mg de cefadroxil, 10 mg de clorotalonil e 300 µL de triadimenol. Comparado aos meios de cultura semi-seletivos descritos por Metha et al., (2005) e Dezordi (2006), verificou-se que todos os meios utilizados foram eficientes na recuperação de Xam em sementes. Por meio da técnica de imunofluorescência indireta, foi possível verificar a presença de Xam em todos os extratos avaliados.
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