Ratos espinhosos do gênero Proechimys estão entre os mais diversos roedores neotropicais e, na Amazônia, suas espécies estão amplamente distribuídas. Devido à sistemática deste grupo ser extremamente complexa, a genética tem sido cadavez mais evocada para auxiliar na delimitação das espécies. Dentro deste cenário, este trabalho teve como objetivo detectar marcadores cromossômicos que pudessem ser utilizados na taxonomia desse gênero. Para tanto, foram analisados citogeneticamente 17 indivíduos de Proechimys da região do médio rio Madeira (interflúvios Purus-Madeira, Madeira-Aripuanã e Aripuanã-Tapajós) (AM) e sete dovale do rio Jari (PA), totalizando 686 células examinadas. Dentre os caracteres cromossômicos, o número diplóide e o número de braços permitiram agrupar esses indivíduos em três grupos distintos: 2n=28, NFA=46 (P. cuvieri e um táxon ainda não determinado provavelmente relacionado ao grupo longicaudatus - sensu Patton 1987 - que aqui denominamos P. gr. longicaudatus � vale do rio Jari e margem direita do rio Madeira, respectivamente); 2n=38, NFA=52 (Proechimys gr.guyannensis � sensu Patton 1987, proveniente do vale do rio Jari); 2n=40, NFA=54 (P. gardneri � margem esquerda do rio Madeira). A morfologia e bandeamento dos cromossomos sexuais também foram espécie-específicos. O bandeamento Gpermitiu emparelhar corretamente os homólogos e em Proechimys gr. guyannensis. e P. gardneri auxiliou na determinação do par sexual. A RON esteve presente numaconstricção secundária, intersticial no braço longo, de um par de submetacêntricos médios, como visto para todas as espécies de Proechimys já analisadas. Entretanto, sua posição no cariótipo foi variável. Ainda, uma duplicação dessaregião em um dos homólogos foi detectada apenas em P. gr. longicaudatus do interflúvio Aripuanã-Tapajós (margem direita do rio Madeira). A heterocromatina constitutiva esteve presente na região pericentromérica da maioria doscromossomos de Proechimys gr. guyannensis e P. gardneri, porém variando os pares marcados entre as duas espécies; já o cromossomo Y apresentou-se totalmente heterocromático em Proechimys gr. guyannensis e sem marcação alguma em P. gardneri. Em P. gr. longicaudatus, o padrão da heterocromatina constitutiva separou a população do interflúvio Aripuanã-Tapajós (citótipo A), com marcações pericentroméricas em alguns pares cromossômicos marcação, das populações do interflúvio Madeira-Aripuanã (citótipo B), com blocos heterocromáticos na região pericentromérica de todos os cromossomos. P. cuvieri apresentou padrão de banda C similar ao citótipo A de P. gr. longicaudatus. Opadrão da heterocromatina constitutiva e da RON foram marcadores fundamentais para a identificação de duas unidades evolutivas de P. gr. longicaudatus na região do médio rio Madeira. Os dados obtidos neste trabalho confirmam a grande diversidade cariotípica do gênero Proechimys e comprovam o uso dos bandeamentos cromossômicos como boa ferramenta na delimitação das espécies. Foi sugerido uma ampliação na distribuição geográfica de P. gardneri e P. gr. longicaudatus e, para as espécies de Proechimys com 2n=38 cromossomos, foi verificado que a ocorrência, por enquanto, está restrita a leste do rio Negro e ao norte do rio Amazonas.