Este trabalho teve como objetivo avaliar a infecção natural e experimental de Babesia equi emninfas e adultos de Boophilus microplus por meio de microscopia óptica e análise molecular.A infecção experimental foi observada a partir de ninfas, machos, fêmeas, ovos e larvas nãoalimentadas de B. microplus alimentados em equinos com infecção crônica por B. equi. Para arealização do experimento foram utilizados dois eqüinos, mestiços, com infecção por B. equi.Os animais foram infestados com larvas de B. microplus de geração F4 obtidas de colôniamantida em laboratório e livres de infecção por Babesia spp. A partir da ecdise para ninfaforam realizadas coletas diárias. Após a coleta foram realizados os exames de hemolinfa eextração do intestino e das glândulas salivares os quais foram macerados em lâminas de vidropara microscopia, fixados em metanol e corados com Giemsa. As glândulas salivaresdissecadas foram divididas em duas partes. A primeira parte foi macerada em lâminas devidro para microscopia, corada com corante Giemsa e observada em microscópio ótico paraanálise morfológica. A segunda parte foi realizada a extração de DNA, sendo submetida aPCR com primers especifícos para o gene 18S rRNA para B. equi. Foram dissecados 860espécimes (ninfas= 432; fêmeas= 280 e machos= 148). Na microscopia óptica foi possívelobservar nas hemolinfas das ninfas a presença de cinetos com aspecto claviforme típicos dogênero Babesia. Nas glândulas salivares, a morfologia e a seqüência dos estágios dedesenvolvimento de B. equi das ninfa s de B. microplus, foram observadas a partir do 4º diaapós ecdise, sendo possível observar nos ácinos celulares a formação de esporoblastos e deesporozoítas ovóides medindo 1,5 ?m de diâmetro e alongados medindo 3,8 a 5,2?m decomprimento e 0,8 a 1,5?m de largura. A reação em cadeia de polimerase (PCR) confirmou apresença de B. equi em DNA de glândulas salivares extraídas de ninfas, machos, fêmeas,assim como dos ovos e larva. A infecção natural foi observada a partir de ninfas e adultos deB. microplus coletados de dois eqüinos naturalmente infestados e comprovadamenteinfectados por B. equi, procedentes do município de Seropédica, Rio de Janeiro. Foramdissecados 324 espécimes (ninfas= 145, fêmeas= 138 e machos= 41). O processamento dasglândulas salivares dissecadas foi semelhante ao descrito para infecção experimental. Dasglândulas salivares submetidas a PCR, 70% apresentaram resultados positivos para B. equi.As análises por microscopia óptica das glândulas salivares das ninfas e dos adultos revelarama presença nos ácinos celulares os estágios de esporoblastos e o desenvolvimento deesporozoítas alongados. As análises morfológicas, morfométricas e moleculares confirmarama infecção experimental e natural das glândulas salivares de ninfas e adultos de B. micropluspor B. equi. Os resultados deste estudo demonstram a capacidade de multiplicação de B. equiem glândulas salivares de ninfas e adultos de B. microplus. A detecção de DNA de B. equi emovos e larvas de B. microplus também sugere a possibilidade da transmissão transovariananesta espécie de carrapato. Estes resultados sugerem que o carrapato B. microplus é vetorbiológico de B. equi na região estudada.